En 2001, Knowles decidió actuar, protagonizada por el actor junto a Mrkhi Phifer, la película de la MTV Carmen: A Hip Hopera.
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En el verano de 2002, Knowles co-estrella en la película Austin Powers in Goldmember, que hace el papel de Foxxy Cleopatra y contracenando con Mike Myers y Michael Caine.
Knowles también grabó la banda sonora de la película, Work it out.ncé
El 3 de noviembre de 2002, Beyoncé firmo un contrato publicitario junto a Pink y Britney Spears para Pepsi, las tres juntas hicieron el anuncio.
Más tarde Beyoncé hizo otro anuncio junto a Jennifer López y David Beckham, pero no fue tan exitoso.
En 2003, Beyoncé junto y el actor Cuba Gooding Jr. protagonizaron, The Fighting Temptation y grabó una canción para ellos, Fighting Temptation, con la participación especial de Missy Elliot, MC Lyte y Free.
La cuarta película de Beyoncé fue, La Pantera Rosa (2006), haciendo el papel de Xania, una cantante de pop, junto a Steve Martin, que hizo atrapalhado papel del Inspector Clouseau.
La película fue lanzada el 10 de febrero de 2006.
Su mayor éxito fue Dreamgirls (2007), su última película, en la que trabajó junto a grandes estrellas, incluyendo Eddie Murphy y Jennifer Hudson. Por esta película, obtuvo una nominación al Globo de Oro a la mejor actriz de comedia o musical, siendo ganada por Meryl Streep por El diablo viste de Prada.
En diciembre de 2008 se estrenó Cadillac Records en la cual también están Adrien Brody y Jeffrey Wright, ésta es una película ambientada en los años 50's en Estados Unidos y en la cual Beyoncé interpreta a Etta James.
Su mas reciente pelicula es Obsessed, estrenada en mayo de 2009. El 14 de febrero del 2010 canta en Santiago, Chile en el Movistar Arena, teniendo miles de espectadores.
Conoció y se hizo amiga de Kelly Rowland, cuya madre trabajó para la familia Knowles; entonces vivían en la misma casa. Viendo que la intención de la niña de dedicarse a la música era seria, Mathew Knowles, padre de Beyoncé, comenzó a buscar un sello musical. Él vio como su trabajo muy bien pagado era rebajado por su empresa, lo que afectó a toda la familia. El alquiler se redujo a la mitad de ellos y tuvieron que trasladarse a dos apartamentos. Cuando el trío firmó con Columbia en 1996, dio a la familia una segunda oportunidad para mejorar la situación. Time también incluyó a Knowles en su lista de las "100 Personas Más Influyentes en el Mundo".
